HeLa傳代復(fù)蘇細(xì)胞株哪提供 "

從基礎(chǔ)的地方教起，一步一步詳細(xì)介紹細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，非常好的開門教程
常用設(shè)備
準(zhǔn)備室的設(shè)備：?jiǎn)握麴s水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、
高壓鍋、儲(chǔ)品柜（放置未消毒物品）、儲(chǔ)品柜（放置消毒過的物品）、包裝臺(tái)。
配液室的設(shè)備：扭力天平和電子天平（稱量藥品）、PH計(jì)（測(cè)量培養(yǎng)用液PH值）、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）。
培養(yǎng)室的設(shè)備：液氮罐、儲(chǔ)品柜（存放雜物）、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱（-80℃）、空調(diào)、二氧化碳缸瓶、邊臺(tái)（書寫實(shí)驗(yàn)記錄）。
放在無菌間的設(shè)備：離心機(jī)（收集細(xì)胞）、超凈工作臺(tái)、倒置顯微鏡、CO2孵箱（孵育培養(yǎng)物）、水浴鍋、三氧消毒殺菌機(jī)、4℃冰箱（放置serum和培養(yǎng)用液）。
無菌操作
無菌室的滅菌：
定期打掃無菌室：每周打掃一次，先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺(tái)等，然后用3‰來蘇爾或者新潔爾滅擦拭。
CO2孵箱（培養(yǎng)箱）滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭，然后用75％酒精擦拭，再用紫外燈照射
實(shí)驗(yàn)前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機(jī)、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘
實(shí)驗(yàn)后滅菌：用75％酒精（3‰新潔爾滅）擦拭超凈臺(tái)、邊臺(tái)、倒置顯微鏡的載物臺(tái)。
實(shí)驗(yàn)人員的無菌準(zhǔn)備：
肥皂洗手。
穿好隔離衣、帶好隔離帽、口罩、放好拖鞋
用75％酒精棉球擦凈雙手。" "

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公司已合作單位有山西中醫(yī)學(xué)院、福建醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院、上海市第六人民醫(yī)院、北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部、四平中心醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學(xué)、中科院上海生命科學(xué)研究院生化與細(xì)胞研究所、解放軍第306醫(yī)院、江南大學(xué)、西南醫(yī)院、吉首大學(xué)、西南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院、寧波大學(xué)、福建醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院、中南大學(xué)、延安大學(xué)附屬醫(yī)院、中國科學(xué)院上海藥物研究所、天津市兒童醫(yī)院、江蘇省中醫(yī)藥研究院、湘雅醫(yī)學(xué)院、第四軍醫(yī)大學(xué)預(yù)防系勞動(dòng)與環(huán)境教研室、揚(yáng)州大學(xué)、上海交通大學(xué)、中國醫(yī)科大學(xué)、浙江省立同德醫(yī)院、中國人民解放軍第150中心醫(yī)院、蘇州大學(xué)、四川大學(xué)華西醫(yī)院、云南大學(xué)、揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院、海南醫(yī)學(xué)院、江蘇腫瘤醫(yī)院、上海市閔行區(qū)中心醫(yī)院、大連醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院、中國科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院、沈陽藥科大學(xué)、廣州市第八人民醫(yī)院、南京大學(xué)、浙江中醫(yī)藥大學(xué)、蘭州大學(xué)、上海中醫(yī)藥大學(xué)、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所、廈門市婦幼保健院、重慶大學(xué)、南京軍區(qū)總醫(yī)院、天津市人民醫(yī)院、北京醫(yī)學(xué)科學(xué)腫瘤醫(yī)院、江蘇大學(xué)、桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、中國科學(xué)院化學(xué)研究所、、鄭州大學(xué)附屬醫(yī)院、湖北省人民醫(yī)院、四川大學(xué)華西第二醫(yī)院、廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院、黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院、青海紅十字醫(yī)院、廣州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、北京紅十字朝陽醫(yī)院、中國醫(yī)科大學(xué)附屬一院、江西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院、山西醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院、上海長(zhǎng)海醫(yī)院、北京阜外醫(yī)院、北京安貞醫(yī)院、上海遠(yuǎn)大心胸醫(yī)院、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院、廣東霍英東心臟中心、中山醫(yī)科大學(xué)中山眼科中心、天津眼科醫(yī)院、溫州醫(yī)學(xué)院附屬眼視光醫(yī)院、北京兒童醫(yī)院、重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院、復(fù)旦大學(xué)附屬兒童醫(yī)院、南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院、湖北十堰市太和醫(yī)院、濟(jì)南市兒童醫(yī)院、中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院、天津醫(yī)科大學(xué)代謝病醫(yī)院" "

細(xì)胞培養(yǎng)集錦(一個(gè)培養(yǎng)300多種細(xì)胞人的經(jīng)驗(yàn)總結(jié))
一、消化與吹打
很多朋友討論細(xì)胞培養(yǎng)問題，見到很多很好的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)，這里說一些我個(gè)人的經(jīng)驗(yàn)，因?yàn)橐恍┍容^特殊的原因，我自己培養(yǎng)接觸過近300種細(xì)胞，常用于做實(shí)驗(yàn)的，累積有百余種，可以說遇到過許多各式各樣古怪的細(xì)胞。這里挑細(xì)胞消化開始做我的篇專題，并不是因?yàn)榧?xì)胞消化重要，而是近期看到大家頻繁討論這個(gè)話題，我就拋磚引玉，下面幾點(diǎn)拙見，可能與其它朋友總結(jié)的一些經(jīng)驗(yàn)有點(diǎn)出入，僅供大家參考。
許多同學(xué)對(duì)細(xì)胞消化做了許多研究，得出了很多有價(jià)值的經(jīng)驗(yàn)，也見到很多人的困惑。其實(shí)細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是細(xì)胞系的培養(yǎng)，就消化而言，不是太難，做得多了，善于總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，就能把細(xì)胞越養(yǎng)越好。一般的程序步驟，細(xì)節(jié)操作，我這里就不講了，只講一些基本操作背后的知識(shí)，如果不對(duì)之處，歡迎指正，一起討論：
1)其實(shí)絕大部分細(xì)胞消化的時(shí)候是只要用胰酶潤洗一遍即可，吸去胰酶后，殘留的那些無法計(jì)算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞（絕大部分1min不到）。對(duì)于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，連續(xù)這樣傳代，對(duì)細(xì)胞傷害很大。簡(jiǎn)單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37度消化。
2)什么算是消化好了呢？不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個(gè)圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動(dòng)了，多半呈沙壯移動(dòng)，其實(shí)已經(jīng)可以了，很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成完全分離細(xì)胞，這是沒有必要的。一般能移動(dòng)了，說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了，細(xì)胞已經(jīng)立分布了（雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布）。這個(gè)時(shí)候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細(xì)胞就是完全成單個(gè)細(xì)胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會(huì)聚集，這個(gè)是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞的一個(gè)特性，無論死活的細(xì)胞都是如此，你可以嘗試，準(zhǔn)備的單個(gè)細(xì)胞懸液，貼壁后觀察細(xì)胞，仍然是幾個(gè)幾個(gè)細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過幾個(gè)小時(shí)就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液（不要笑，這個(gè)是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯(cuò)誤，以為懸浮培養(yǎng)就是一個(gè)一個(gè)分開）。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來，這個(gè)時(shí)候即使是成片的（比如Calu-3細(xì)胞），吹打不超過20次后（一般10次即可），成小規(guī)模聚集（10個(gè)細(xì)胞左右），是正常的，不要試圖再去延長(zhǎng)消化時(shí)間，或者像有的同學(xué)那樣吹打1h，等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。
3)我常看到一個(gè)比較復(fù)雜的四步消化法，這個(gè)挺有意思，我也是次聽說，應(yīng)該是網(wǎng)友自己發(fā)展出來的方法，很有參考價(jià)值。但我估計(jì)這個(gè)方法可能對(duì)付少數(shù)非常怪異的細(xì)胞才需要這么復(fù)雜的程序。我目前養(yǎng)過的近300株細(xì)胞里面，還沒遇到這么怪異的。比如Caco2其實(shí)是很好消化的細(xì)胞，不需要胰酶孵育即可，只是有點(diǎn)成片分布。不要以為成片分布是自己沒養(yǎng)好，這個(gè)視細(xì)胞而定。如果和標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)不一致，那可能是自己沒消化好導(dǎo)致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至完全吹打成單細(xì)胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細(xì)胞的特性，是因?yàn)橘N壁過程中重新聚集了。這個(gè)時(shí)候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細(xì)胞之后會(huì)對(duì)你越來越不好。
4)比較難消化的細(xì)胞（潤洗方法5min還不能消化），就以colon cancer為例，比如HCT15, LS411和KM12，這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100 mm dish，一次多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞，一般不超過5min，即可見細(xì)胞成片移動(dòng)，就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會(huì)有難消化的時(shí)候，比如tsDC細(xì)胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動(dòng)。
5)常規(guī)的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（增殖，凋亡，遷移，分化之類的），受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話（難消化細(xì)胞例外）。但少數(shù)實(shí)驗(yàn)，比如病毒包裝，對(duì)細(xì)胞代數(shù)，對(duì)細(xì)胞狀態(tài)要求。這個(gè)時(shí)候，胰酶消化，就是潤洗，都會(huì)對(duì)細(xì)胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細(xì)胞包裝能力就會(huì)逐漸下降（當(dāng)然也有其它因素影響包裝效率）。這個(gè)時(shí)候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關(guān)酶的活性，來使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白。
6)EDTA的作用。許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用trypsin/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白，trypsin切割ECM的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于Integrin的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在trypsin里添加一些EDTA，或者對(duì)付特別難消化的細(xì)胞，添加多一些EDTA，就是這個(gè)道理。一般不要試圖延長(zhǎng)消化時(shí)間（如果10min還消化不的話），而應(yīng)該想其它辦法。
7)PBS洗滌。消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因?yàn)镾erum含有抑制trypsin的蛋白。但這里面也有學(xué)問可以講，對(duì)于一些難消化細(xì)胞，那么可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因?yàn)檫@些離子也會(huì)抑制trypsin的活性。但對(duì)于絕大部分胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化的細(xì)胞，不需要配制如此溶液。
總結(jié)下來，雖然以上說的是關(guān)于消化的，但其實(shí)消化并不是細(xì)胞培養(yǎng)的關(guān)鍵所在（雖然很重要），關(guān)鍵所在是細(xì)胞來源，血清質(zhì)量和水源（自己配制溶液的話）。我看到版上許多人養(yǎng)細(xì)胞遇到各種各樣的問題，很多時(shí)候bottleneck沒有找到，雖然通過其它方法有所改善，但仍然是事倍功半。因?yàn)槿藗兺⒁庾约旱牟僮?，總覺得自己沒有經(jīng)驗(yàn)，而忽視試劑，溶液尤其是細(xì)胞的質(zhì)量，后者其實(shí)才是許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室常見的問題。" "

無菌操作的演示：
凡是帶入超凈工作臺(tái)內(nèi)的酒精、PBS、培養(yǎng)基、胰蛋白酶的瓶子均要用75％酒精擦拭瓶子的外表面
靠近酒精燈火焰操作。
器皿使用前過火滅菌
繼續(xù)使用的器皿（如瓶蓋、滴管）要放在高處，使用時(shí)仍要過火。 各種操作要靠近酒精燈，動(dòng)作要輕、準(zhǔn)確，不能亂碰。如吸管不能碰到廢液缸。
吸取兩種以上的使用液時(shí)要注意更換吸管，防止交叉污染。
器械的清洗和消毒
玻璃器械洗消：
一、新的玻璃器皿的洗消：
自來水刷洗，除去灰塵。
烘干、泡鹽酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀鹽酸中12小時(shí)以除去臟物、鉛、砷等物。
刷洗、烘干：12小時(shí)后立即用自來水沖洗，再用洗滌劑刷洗，自來水沖干凈后用烤箱烘干。
泡酸、清洗：用清潔液（重鉻酸鉀120g：濃硫酸200ml：蒸餾水1000ml）浸泡12小時(shí)，然后從酸缸內(nèi)撈出器皿用自來水沖洗15次，后蒸餾水沖洗3-5次和用雙蒸水過3次。
烘干、包裝：洗干凈后先烘干，然后用牛皮紙（油光紙）包裝。 高壓消毒：包裝好的器皿裝入高壓鍋內(nèi)蓋好蓋子，打開開關(guān)和安全閥，當(dāng)蒸氣成直線上升時(shí)，關(guān)閉安全閥，當(dāng)指針指向15磅時(shí)，維持20-30分鐘。
高壓消毒后烘干
二、舊的玻璃器皿的洗消：
刷洗、烘干：使用過的玻璃器皿可直接泡入來蘇爾液或洗滌劑溶液中，泡過來蘇爾溶液（洗滌劑）的器皿要用清水刷洗干凈，然后烘干。
泡酸、清洗：烘干后泡入清潔液（酸液），12小時(shí)后從酸缸內(nèi)撈出器皿立即用自來水沖洗（避免蛋白質(zhì)干涸后粘附于玻璃上難以清洗），再用蒸餾水沖洗3次。
烘干、包裝：洗干凈的器皿烘干后取出用牛皮紙（油光紙）等包裝。" "

公司提供部分ATCC細(xì)胞有(限于頁面篇幅，公司全部細(xì)胞并未展示，如有具體所需細(xì)胞，請(qǐng)咨詢我們哦┈技┈術(shù)(訂購)┈熱┈線：0┈2┈1┈5┈4┈3┈8┈5┈3┈1┈3(1┈5┈8┈0┈0┈5┈7┈6┈8┈6┈7┈微┈信┈同┈號(hào))┈聯(lián)┈系┈Q┈Q：3┈3┈0┈6┈0┈8┈4┈3┈5┈0)；CRL-1459|CCD-18Co細(xì)胞；CRL-2797|MOVAS細(xì)胞；CRL-1831|FHC細(xì)胞；CRL-2638|CT26.WT [CT26WT]細(xì)胞；HB-8064|Hep 3B2.1-7細(xì)胞；CCL-2.1|Hela 229細(xì)胞；HB-8065|Hep G2細(xì)胞；CCL-131|Neuro-2a/N2a細(xì)胞；CRL-2780|ATRFLOX[Mutatect]細(xì)胞；CL-188|LS174T細(xì)胞；CRL-2547|Panc 10.05細(xì)胞；HB-8065|HepG-2細(xì)胞；CCL-13|HeLa[Chang Liver]細(xì)胞；CRL-2233|SNU-398細(xì)胞；CCL-75.1|WI－38AV13細(xì)胞；CRL-5892|NCI-H1755[H1755]細(xì)胞；CRL5844|NCI-H838[H838]細(xì)胞；CRL-5875|NCI-H1563[H1563]細(xì)胞；CRL-5928|NCI-H2170[H2170]細(xì)胞；CRL-2177|SW 1271[SW-1271; SW1271]細(xì)胞；CRL-5889|NCI-H1703[H1703]細(xì)胞；CRL-5826|NCI-H226[H226]細(xì)胞；CRL-5900|NCI-H1869[H1869]細(xì)胞；HTB-59|SW 900[SW-900; SW900]細(xì)胞；CRL-1573|HEK-293細(xì)胞；CRL-1441|G401細(xì)胞；CRL-1500|ZR75-1細(xì)胞；CRL-1504|ZR75-30細(xì)胞；HTB-126|Hs-578T細(xì)胞；CRL-1897|UACC812細(xì)胞；HTB-111|AN3 CA細(xì)胞；CCL-2.1|HeLa229細(xì)胞；CRL-7924|HeLa-S3細(xì)胞；HTB-81|DU-145細(xì)胞；CRL-11610|RWPE2細(xì)胞；CRL-7002|Hs 1.Tes細(xì)胞；CRL-7131|Hs 181.Tes細(xì)胞；CRL-1740|LNCaP clone FGC細(xì)胞；" "

C1606 Hs 888.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1605 Hs 870.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1604 Hs 863.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1603 Hs 852.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1602 Hs 840.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1601 Hs 839.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1600 Hs 822.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1599 Hs 821.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1598 Hs 819.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0594 Hs 793.Sk傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1597 Hs 766T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1596 Hs 742.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1595 Hs 739.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1594 Hs 737.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1593 Hs 729傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1592 Hs 706.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1591 Hs 695T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C4734 Hs 683傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1588 Hs 675.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1587 Hs 611.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1586 Hs 606.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1585 Hs 604.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1584 Hs 600.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0593 Hs 578T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C4445 Hs 578Bst傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1583 Hs 343.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1582 Hs 294T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1581 Hs 281.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C1580 Hs 274.T傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C4451 Hs 181.Tes傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C4450 Hs 1.Tes傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0591 HRT-S1傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0590 HRPEpiC傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0589 hRMECs傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0588 HRMC傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0587 HRGEC傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0586 HREpiC傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0585 HRCEpiC傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0584 HRC-99傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C7007 HRA-19傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0583 HR-8348傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0582 HPT-8傳代培養(yǎng)細(xì)胞株
C0581 HPNC傳代培養(yǎng)細(xì)胞株"